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尖銳濕疣常用的五種診斷方法

時間:2011-12-08  來源:未知   作者:danien   點擊:

  一、醋酸白試驗
  
  用3-5%醋酸外涂疣體2-5分鐘,病灶部位變白稍隆起,肛門病損可能需要15分鐘。本試驗的原理是蛋白質與酸凝固變白的結果,HPV感染細胞產生的角蛋白與正常的未感染上皮細胞產生的不同,只有前者才能被醋酸脫色。醋酸白試驗檢測HPV的敏感性很高,它比常規檢測觀察組織學變化還好。但偶爾在上皮增厚或外傷擦破病例中出現假陽性、假陽性變白跡象顯得界限不清和不規則。美國CDC提示,醋酸白試驗并不是特異試驗,且假陽性較常見。
  
  二、免疫組織學檢查
  
  常用過氧化物酶抗過氧化物酶方法(即PAP),顯示濕疣內的病毒蛋白,以證明疣損害中有病毒抗原。HPV蛋白陽性時,尖銳濕疣的淺表上皮細胞內可出現淡紅色的弱陽性反應。
  
  三、組織化學檢查
  
  取少量病損組織制成涂片,用特異抗人類乳頭瘤病毒的抗體作染色。如病損中有病毒抗原,則抗原抗體結合。在過氧化物酶抗過氧化物酶(PAP)方法中,核可被染成紅色。此法特異性強且較迅速,對診斷有幫助。
  
  四、病理檢查
  
  主要為角化不全,棘層高度肥厚,乳頭瘤樣增生,表皮突增厚,延長,其增生程度可似假性上皮瘤樣。刺細胞和基底細胞并有相當數量的核分裂、頗似癌變。但細胞排列規則,且增生上皮和真皮之間界限清楚。其特點為粒層和刺層上部細胞有明顯的空泡形成。此種空泡細胞較正常大,胞漿著色淡、中央有大而圓,深嗜堿性的核。通常真皮水腫、毛細血管擴張以及周圍較致密的慢性炎性浸潤。Bushke-loewenstein巨大型尖銳濕疣,表皮極度向下生長,代替了其下面的組織、易與鱗狀細胞相混,故須多次活檢。若有緩慢發展之傾向, 則為一種低度惡變的過程,即所謂疣狀癌。
  
  五、基因診斷
  
  迄今,HPV難于用傳統的病毒培養及血清學技術檢測,主要實驗診斷技術是核酸雜交。近年來發展的PCR方法具有特異、敏感、簡便、快速等優點,為HPV檢測開辟了新途徑。
  
  (一)標本的采集及處理
  
  1.標本的采集和預處理:用刮板或生理鹽水浸潤的棉棒從陰道和宮頸外口取分泌物和細胞。在作細胞學檢查的同時,將標本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中,用PBS離心(3000g,10min)洗滌2次,沉積細胞重懸于1mlPBS中,取0.5ml細胞懸液抽提DNA。
  
  2.標本核酸的提取:按1體積細胞懸液加10倍體積的細胞裂解液(10mmol/L Tris-HCl,pH 7.4,10mmol/L EDTA,150mmol/L NaCl,0.4%SDS,1.0mg/ml蛋白酶K)37℃下處理過夜;且等體積酚/氯仿(1:1),氯仿/異戊醇(24:1)各抽提2次;加1/10體積3mol/L NaAc(pH 5.2)及2.5倍體積無水乙醇置-20℃ 2h或過夜沉淀DNA;加1體積乙醇洗滌1次;用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/L Tris-HCl,pH 8.0,1.0mmol/L EDTA)溶解DNA,37℃溫育30min。
  
  (二)PCR擴增
  
  1.  引物設計和合成:HPV基因組可分為早期區(E)和晚期區(L),每區含一系列開放讀碼框架(ORF)。序列分析表明,各型HPV的非編碼區及E1、E6、E7和L1區均有保守序列。Manos等從HPVL1區中選擇保守序列設計合成引物MY11和MY09見表1,該引物與HPV 6、11、16、18及33型有互補序列,也可擴增其它型HPV。
  
  2.PCR反應試劑:Taq DNA聚合酶(2U/ml)、10mmol/L dNTP貯備液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L),10×PCR緩沖液(500mmol KCl、40mmol/L MgCl2、100mmol/L Tris-HCl、pH 8.5),100μmol/L MY11和MY09貯備液,滅菌的玻璃蒸餾器制備的蒸餾水。
  
  3.PCR擴增方法和程序:以100μl PCR反應液,用無菌0.5ml硅化塑料離心管為反應管進行擴增反應。(責任編輯:admin)

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尖銳濕疣的病原體是人類乳

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